Исследования » Антивирусное действие препарата «ЭнергоЙод»
Антивирусное действие препарата «ЭнергоЙод»
Перечень основных антивирусных средств, используемых в клинике вирусных заболеваний, свидетельствует о недостаточности химиотерапевтических препаратов, избирательно подавляющих вирусоспецифические процессы в клетках. Антивирусные препараты все еще менее эффективны по сравнению с антибиотиками широкого спектра. Кроме того, большинство из них действует на сравнительно узкий круг вирусов. Терапевтический эффект антивирусных средств уступает их профилактическому эффекту, при этом клиническое применение большинства препаратов ограничено их токсичностью.
В свете этих данных представлялось актуальным исследовать антивирусную активность нового препарата «ЭнергоЙод» - водного раствора комплексных соединений йода с низко- и высокомолекулярными синтетическими и природными соединениями.
Антивирусная активность указанного препарата изучена в отношении вируса гриппа (ВГ) типа А, штамма А/А ichi 2/68 (H3N2) – представителя ортомиксовирусов, вируса простого герпеса человека второго серотипа (семейство герпес-вирусов), а также вируса энцефаломиокардита – ВЭМ (семейство пикорнавирусов).
Материалы и методы:
Препараты. Оригинальный изучаемый препарат использован в виде водных растворов в разведениях от 1/5 до 1/80, приготовляемых ex tempore. Токсичность препарата изучена на клеточной культуре, у мышей и на КЭ (куринных эмбрионах).
Официальные антивирусные препараты – ремантадин и ацикловир использованы в качестве положительных контролей в опытах на мышах и КЭ.
Вирусы. В опытах использованы вирусы гриппа типа А (ВГ), вирусы простого герпеса 2-го серотипа (ВПГ) и вирус энцефаломиокардита мышей (ВЭМ).
Клеточные культуры. Для усиления и накопления вирусов, для изучения антивирусной активности использованы перевиваемая линия аденокарциномы гортани человека Нер-2 и первичная культура фибробластов.
КЭ-ФЭК. Клетки культивировали в среде Игла с глютамином и бычьей сывороткой (Нер-2) и в среде 199 с сывороткой (ФЭК).
Животные. Использовано 160 беспородных белых мышей весом 12-14 г. Заражение – интраназальное и внутрибрюшинное. Для накопления ВПГ и ВЭМ – внутримозговое заражение.
КЭ. Использовано 140 КЭ в возрасте 10-12 дней, введение вирусов и препарата – в аллантоисную полость и на хорионаллантоисную оболочку.
Методы исследования:
Титрование вируса на клеточных культурах по цитопатическому эффекту. Определение титров по методам Кербера.
Титрование вирусов на мышах по методу Рида и Менча.
Титрование вирусов на Куринных эмбрионах (КЭ).
В реакции гемагглютинации (РГА).
Антивирусный эффект препарата «ЭнергоЙод» в отношении различных доз вируса выявляли по степени ингибиции репродукции вирусов клеточной культуре и КЭ, по эффективности защиты мышей от экспериментальных вирусных инфекций (критерии – летальность, репродукция вируса в легких, длительность инкубационного периода и средняя продолжительность жизни).
Препарат использован в различных условиях эксперимента: при введении до и после инфицирования, а также при одновременном с вирусом введении.
Полученные результаты подвергнуты статистической обработке.
Анализ полученных данных свидетельствует об АВ–активности препарата в отношении вирусов, представителей различных семейств царства "vira" – вируса гриппа А/А или 2/68 H3N2(ортомиксовирусы), вируса простого герпеса серотипа 2 (П-герпесвирусы) и вируса энцефаломиокардита (пикорнавирусы). Исследования проводились на 3 уровнях – in vitro, в развивающихся КЭ и in vivo – на мышах.
Препарат был нетоксичен для клеточной культуры в концентрациях 1/20, 1/40, 1/80, для КЭ (1/10, 1/20, 1/40, 1/80) и для мышей - 1/5, 1/10, 1/20, 1/40. АВ–действие препарата проявлялось на всех уровнях при одновременном, предварительном и последующем введении его внутрибрюшинно, однако эффект зависел от дозы, и большей частью был более оптимальным при предварительном введении.
АВ-активность препарата выражалась в достоверной ингибиции репродукции вируса в клеточных культурах и КЭ, в защите от развития экспериментальной гриппозной инфекции и экспериментального энцефаломиокардита у мышей, достоверном снижении гибели животных, отсутствии репродукции вируса в легких, удлинении инкубационного периода и средней продолжительности жизни мышей.
Исследования механизмов АВ-действия препарата методами молекулярной биологии не было целью наших исследований, однако ряд фактов, накопленных при изучении взаимодействия препарата с вирусом на клеточном уровне, указывает на вирулицидное действие препарата и на способность его воздействовать на ранние стадии вирусной репродукции ¬адсорбцию, проникновение в клетку и, возможно, депротеинизацию ¬ раздевание вируса.
Тот факт, что опыты, где смесь ВЭМ (в дозе 2,5 х 105 ТДЦ50) с препаратом (в разведении 1/20), выдержанная при комнатной температуре, не вызывала ЦПД в клетках, свидетельствует о способности препарата нейтрализовать вирус в указанной дозе, тогда как контроль ВЭМ в той же дозе вызывал полную дегенерацию пласта уже спустя 24 часа. Эти данные говорят о вирулицидности препарата, что не исключает возможности его воздействия на чувствительные к вирусу клетки, препятствуя адсорбции и проникновению вируса в клетку. Об этом свидетельствуют описанные раннее опыты, где предварительное введение препарата с последующим тщательным его отсасыванием и отмыванием клеток Нер-2, ингибирует репродукцию вируса на 2-3 log по сравнению с контролем. Несмотря на удаление препарата, последний во время адсорбции мог вызвать изменения физико-химических свойств клеточной мембраны, в частности ее заряда, что, в свою очередь, могло привести к нарушению контакта вируса со специфическими к нему рецепторами клетки – ведь таков механизм действия многих поверхностно активных препаратов, в частности этония. Ремантадин, накапливаясь в клеточных мембранах, и изменяя их заряд и pH, препятствует раздеванию вируса - одному из ранних этапов вирусной инфекции.
Итак, есть основания полагать, что изучаемый препарат, нарушая ранние этапы инфекционного цикла, тем самым препятствует экспрессии вирусного генома и последующим стадиям репродукции вируса ¬транскрипции, трансляции, репликации вирусных РНК и ДНК, сборке вирионов и их выходу из клетки. Основным действующим началом изучаемого нами препарата является йод, и в этой связи следует упомянуть ряд известных антивирусных препаратов, содержащих йод, в частности этин, йодантипириламид, 5-йод-2-дезоксиуридин и др.
Полученные в опытах in vitro и in vivo данные об АВ-действии препарата «ЭнергоЙод» и отсутствии у него токсичности, а также его хорошая растворимость в воде, способность нейтрализовать вирус вне клетки и нарушать ранние стадии вирусной репродукции, наличие как профилактического, так и терапевтического эффекта, достаточно широкий спектр действия, позволяют признать его в качестве эффективного средства для химиотерапии вирусных инфекций.